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IF=33.9！复旦附属同济医院团队顶刊大突破，多组学 + 单细胞测序解锁 MSS 结直肠癌免疫治疗密码

来源：特诺科研

微卫星稳定型结直肠癌（MSS CRC）是免疫治疗的 “硬骨头”—— 占 CRC 的 85% 以上，却对 PD-1 抑制剂几乎无响应，患者复发风险高，核心耐药机制一直是临床难题。

近日，同济大学附属同济医院、复旦大学附属肿瘤医院团队联合在《Molecular Cancer》（肿瘤顶刊，IF=33.9，0 版面费）发表重磅成果：通过 “多组学 + 单细胞 + 体内外实验” 的完整闭环，首次建立基于免疫相关去泛素化酶（IR-DUBs）的 MSS CRC 分型体系，锁定核心靶点 USP7，证实其通过抑制 CXCL9/10/11 分泌阻断 CD8⁺T 细胞招募，而靶向 USP7 联合 PD-1 抑制剂能让 “冷肿瘤” 变 “热”，显著提升治疗效果！

文章信息速览

原标题：Immune-related deubiquitylation spectrum of microsatellite stability colorectal cancer reveals USP7 as a potential immunotherapeutic target
期刊：Molecular Cancer（IF=33.9，肿瘤顶刊，0版面费）
关键词：微卫星稳定型结直肠癌（MSS CRC）、USP7、免疫治疗耐药、去泛素化酶（DUBs）、单细胞测序、多组学、冷肿瘤热转化

研究背景与临床痛点

MSS CRC 的免疫治疗困境的临床 “老大难”：

占比高、响应差：85% 以上 CRC 为 MSS 型，PD-1 抑制剂单药响应率不足 5%，患者缺乏有效治疗方案；

机制模糊：已知 MSS CRC 是 “冷肿瘤”，但驱动免疫荒漠表型的核心分子和细胞机制一直不明确；

研究核心目标

① 筛选 MSS CRC 免疫相关去泛素化酶（IR-DUBs），建立具有临床意义的分子分型；② 挖掘调控免疫荒漠表型的核心靶点；③ 阐明靶点介导免疫耐药的分子机制；④ 验证靶点的临床转化价值，为 MSS CRC 免疫增敏提供新策略。

研究核心亮点：

这篇 IF=33.9 顶刊的精髓在于 “从临床问题出发，用多组学层层拆解，最后落地临床转化”，7 个核心步骤完美契合医生发文逻辑，每个步骤都有明确数据和图号支撑：

第一步：多队列筛选，锁定免疫相关去泛素化酶（IR-DUBs）（图 1）

研究先整合 TCGA+4 个 GEO 队列（共 1900 例 CRC 样本，1577 例 MSS），通过 8 种免疫浸润算法（ssGSEA、CIBERSORT 等）交叉验证，筛选出 22 个与 CD8⁺T/NK 细胞浸润强相关的 IR-DUBs（16 个负相关、6 个正相关），其中 USP7 在 MSS 与 MSI-H CRC 中突变频率差异最显著（16% vs 3%，P=5.29e-04，图 1E）。

图1

医生发文启示：多算法 + 多队列验证是顶刊 “硬通货”，避免单一数据来源的偏倚，提升结果可靠性。

第二步：建立 DUB 分型体系，区分 “冷 / 热”MSS CRC（图 2）

基于 5 个核心负相关 IR-DUBs（USP7、USP10 等）进行共识聚类，将 MSS CRC 分为 DUB-H 和 DUB-L 两型：

DUB-L 型：免疫评分高、T 细胞炎症 GEP 评分高、TIDE 评分低，CD8⁺T/NK 细胞浸润丰富，复发 - free 生存（RFS）显著更长（图 2F），是 “热肿瘤” 表型；

DUB-H 型：免疫荒漠表型，细胞周期、血管生成通路激活，预后差；

验证：该分型在 5 个独立队列中稳定重现，且是独立预后因素（HR 值显著，图 2G）。

图2

医生发文启示：分子分型需结合免疫表型和预后价值，且要在多队列中验证稳定性，才能体现临床意义。

第三步：USP7 特异性高表达，是 MSS CRC 免疫耐药的核心靶点（图 3-4）

深入分析发现 USP7 是分型体系中的 “关键分子”：

表达特异性：MSS CRC 肿瘤组织中 USP7 显著高表达，而 MSI-H CRC 与正常组织无差异（图 3C-E），本地队列 IHC 验证一致（图 4D-E）；

临床关联：USP7 高表达与 MSS 状态、CMS2 亚型、远端肿瘤位置显著相关（图 4B、F），且 MSS CRC 患者 USP7 低表达组总生存期显著更长（图 4G）；

免疫相关性：USP7 表达与 CD8⁺T/NK 细胞浸润、免疫评分、IFN-γ 信号呈强负相关（图 3A-B、I-J），且与 MMR 基因（MLH1、MSH2 等）正相关。

图3

图4

医生发文启示：靶点选择需满足“表达特异性 + 临床关联 + 免疫相关性”，多维度交叉验证提升靶点可信度。

第四步：单细胞 + 多重免疫荧光，实锤 USP7 介导免疫荒漠表型（图 5）

用单细胞 RNA-seq（GSE132465）和多重免疫荧光（mIF）验证机制：

单细胞分析：USP7 高表达样本中上皮细胞占比高，CD8⁺T/CD4⁺T 细胞、髓系细胞富集度低，细胞间通讯弱（图 5B-D）；

mIF 验证：USP7 高表达的 MSS CRC 中，CD3⁺CD8⁺T 细胞、CD3⁻CD56⁺NK 细胞、GZMB⁺功能细胞比例显著降低（图 5F、H-I），且 USP7 主要定位于肿瘤上皮细胞，与免疫细胞空间排斥（图 5G）；

图5

医生发文启示：单细胞 + 空间 / 多重免疫荧光是验证 “分子 - 细胞 - 表型” 关联的关键技术，顶刊高度青睐这种 “从宏观到微观” 的验证逻辑。

第五步：体外机制验证，USP7 通过抑制 CXCL9/10/11 阻断 T 细胞招募（图 6）

细胞实验明确分子机制：

分泌组分析：USP7 敲低后，MSS CRC 细胞（SW480、SW1116）分泌 CXCL9/10/11 等 T 细胞招募趋化因子显著增加（图 6A）；

通路验证：USP7 敲低激活 IFN-γ 信号和 T 细胞介导的免疫通路（图 6E-F）；

功能实验：USP7 敲低或抑制剂（P5091）处理后，CD8⁺T 细胞迁移能力增强，分泌 IFN-γ、GZMB、TNF-α 增加，T 细胞介导的肿瘤杀伤效率显著提升（图 6H-L）。

图6

医生发文启示：机制研究需聚焦“核心通路 + 功能验证”，从 “分泌 - 招募 - 激活 - 杀伤” 形成完整链条，实验设计要兼顾基因敲低和药物抑制，提升转化价值。

第六步：体内实验证实，USP7 抑制剂联合 PD-1 抑制剂显著增敏（图 7-8）

动物实验验证治疗效果：

基因敲低模型：USP7 敲低 + 抗 PD-1 联合治疗，CT26 荷瘤小鼠肿瘤体积显著缩小，生存期延长，肿瘤内 CD8⁺T/NK 细胞浸润和功能增强（图 7B-G、H-Q）；

图7

药物联合模型：USP7 抑制剂 P5091 + 抗 PD-1 治疗，同样显著抑制肿瘤生长，增加 CD8⁺T/NK 细胞浸润，且对脾脏免疫细胞组成有系统性调控作用（图 8B-G、H-M）；

图8

交叉验证：在 MSI-H MC38 模型中，P5091 也能抑制肿瘤生长，但效果弱于 MSS 模型（图 S9J-N），证实靶点特异性。

医生发文启示：体内实验需设置“单药 + 联合” 分组，重点关注免疫微环境重塑效果，为临床联合用药提供直接依据，是顶刊必备的转化证据。

第七步：临床关联验证，USP7 低表达预测免疫治疗响应（图 9）

小样本临床队列初步验证：

10 例接受抗 PD-1 治疗的晚期 MSS CRC 患者中，免疫治疗响应者（PR）的 USP7 表达显著低于无响应者（SD/PD）（图 9A-B）；

USP7 低表达患者总生存期更长（图 9C），提示 USP7 可作为 MSS CRC 免疫治疗响应的预测标志物。

图9

医生发文启示：即使是小样本临床队列，也能显著提升论文的临床转化价值，顶刊重视“基础 - 临床” 的衔接。

临床价值：

对临床医生：① DUB 分型可精准分层 MSS CRC 患者，DUB-L 型可能直接受益于免疫治疗，DUB-H 型需联合 USP7 抑制剂；② USP7 可作为免疫治疗响应的预测标志物（IHC 可检测），帮助筛选获益人群；③ 提供新治疗方案：USP7 抑制剂 + PD-1 抑制剂，为 MSS CRC 患者带来新希望。
对科研人员：① 建立 “IR-DUBs - 免疫表型 - 预后” 的关联体系，为 CRC 免疫分型提供新视角；② 阐明 USP7-CXCL9/10/11-CD8⁺T 细胞招募的核心机制，丰富 “冷肿瘤” 热转化的理论；
对患者：MSS CRC 不再是免疫治疗 “禁区”，USP7 靶向联合免疫治疗有望显著提升响应率，延长生存期。

总的来说，这篇 IF=33.9 的顶刊，示范了临床医生做多组学研究的核心逻辑：

选题：临床痛点（MSS CRC 免疫耐药）+ 技术创新（IR-DUBs 分型 + 多组学整合）+ 转化价值（靶点 + 联合治疗方案）；
逻辑：多队列筛选（IR-DUBs）→ 分子分型（DUB-H/L）→ 靶点锁定（USP7）→ 机制解析（单细胞 + 体外实验）→ 体内验证（联合治疗）→ 临床关联（响应预测）；
加分：多技术交叉（多组学 + 单细胞 + 空间验证）+ 实验闭环（基因敲低 + 药物抑制 + 体内外）+ 临床落地（分型 + 标志物 + 治疗方案）。